參考區間是介于參考上限和參考下限之間的值，是臨床做出醫療決策的重要考量因素。隨著體外診斷檢測技術的不斷發展，各種檢測項目層出不窮，雖然給臨床疾病的診斷帶來一定的幫助，但如果參考區間建立的不合理也會給臨床決策造成誤判。本文簡要介紹參考區間建立和驗證的一般原則、方法和上市產品臨床應用中存在的一些問題。

1.參考區間的建立與驗證的一般原則

第一，擬上市產品應該按照適用人群建立合理的參考區間。

第二，實驗室應該優先選擇衛生行政部門發布的行業標準或專家共識等證據級別較高的文件推薦使用的參考區間，并驗證其在本實驗室的適用性"。比如∶WS/T404規定了中國成年人血清丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶等指標的參考區間及其應用，可以根據實際情況參照使用。

第三，參考區間的數據轉移。建立參考區間需要投入大量的人力、物力資源，如果通過一些經濟、簡單的驗證程序進行參考區間的轉移，可以使復雜的過程變成現實。

第四，實驗室選擇產品時，首先關注擬使用產品的參考區間人群是否合適，其次驗證參考區間的適用性。

2.參考區間建立，數據轉移后的驗證方法

2.1參考區間建立的方法

建立一個新的分析物參考區間，需要按照以下程序進行;①查閱文獻，了解影響該分析物的生物變異和干擾因素等;②建立參考個體的選擇、排除和分組標準;③編制知情同意書、調查表等;④設定合適的置信區間，確定合適的參考個體人數;⑤做好采樣前準備，正確收集和處理樣本，在良好的質量控制條件下，對樣本進行檢測，獲得參考值結果;⑥檢查、分析數據，選擇合適的統計方法，估計參考區間;⑦記錄所有過程，并留存歸檔。

2.2數據轉移后的驗證方法

擬上市產品或接收實驗室希望驗證已上市產品或其他供體實驗室報告的參考區間進行數據轉移。主要方式有以下三種。

2.2.1主觀評價驗證。

轉移的可接受性可以主觀地通過評價已上市產品/供體實驗室參考區間研究的相關內容。主要評價內容包括∶適用人群地理位置或人口統計學變量，分析前和分析過程的細節，產品分析性能，所有的參考值數據以及估計參考區間的方法。

2.2.2小樣本量驗證。

轉移的可接受性還可以通過檢測接收實驗室自己的受試者群體中少量參考個體（n=20）來評估，并將這些檢測結果與更充分的原始研究進行比較。原始參考區間研究中的分析前和分析中因素需要與接收實驗室的操作保持一致。這20個參考個體應合理地代表接收實驗室的健康人群，并滿足排除和劃分標準。測試結果應排除異常值。如果20名受試者中不超過2個（或10%的檢測結果）超出最初報告的95%參考限值，則已上市產品或供體實驗室報告的95%參考限值可被認為適用擬上市產品或接收實驗室。如果有3或4個測試結果超出了這些限度，則應獲得與前20個類似的另外20個參考樣本，同樣沒有異常值。如果這些新結果中不超過2個超出已上市產品或供體實驗室報告的參考限度，后者被認為是可接受的。但是，如果有3個或更多的結果再次超出限度，則應重新檢查所使用的分析方法，考慮取樣的兩個人群的生物學特性可能存在差異，并考慮擬上市產品或接收實驗室是否應建立自己的參考區間。

2.2.3大樣本量驗證。

部分參考區間對于臨床分析至關重要的分析物，實驗室可以選擇進行更廣泛的參考區間轉移研究。在這種情況下，數據轉移的可接受性可以通過檢測接收實驗室自己的受試者群體中的更大的參考個體（如n=60），并將這些參考值與更充分的原始研究進行比較來評估和驗證。

3.討論

參考區間是判斷檢測結果是否正常，以輔助疾病診斷的重要依據。建立參考區間入組人群與使用該產品人群的差異必然會導致結果難以解釋。尤其進口產品建立適合原產國地區的參考區間，但是沒有中國人群的數據，檢測結果是否能夠反映中國人群的真實健康狀況值得商榷。建議擬上市產品注冊人應該針對中國人群進行多中心研究，建立符合中國人群的參考區間。

參考區間建立研究工作量和成本巨大，隨著越來越多的檢驗項目和方法引入實驗室，獨立的實驗室建立參考區間不太現實，可操作性較小。實驗室尋找合適的參考區間進行驗證更為合理。比如∶實驗室采用衛生行政部門發布的行業標準或專家共識等。這樣既能給出權威的判讀結果，同時也有利于檢驗結果的互認。同時建議擬上市產品注冊人在開發同類產品時，重點關注結果的可追溯性和量值溯源標準化，這樣參考區間才能與臨床普遍認可和使用的參考區間一致。

參考區間的數據轉移是通過一些簡單可行的程序，把已上市產品/供體實驗室已建立的參考區間轉移到擬上市產品/接收實驗室非常有效的方法。但是數據轉移的前提條件是檢測系統的可比性和檢測人群的可比性。檢測系統可比性的問題，可以按照CLSIEP文件利用患者樣本進行方法學比較進行評價。一般情況下，如果分析系統存在類似不精確度和干擾問題，溯源到相同或類似的標準物質，采用相同的單位進行報告，并且根據方法學比較判斷結果是可接受的，則可將參考區間轉移到新的或替代檢測系統中。另一個轉移需要考量的重要因素是人群的可比性，如果原始參考區間研究的入組人群在地理分布或者人口統計學上存在差異，參考區間是不能轉移的。

建議上市產品在說明書中提供參考區間研究的詳細內容，包括入組人群種類、組成、參考個體數量、參考個體排除標準、分組考慮因素、數據處理和分析等內容。這些細節信息不僅可以方便其他擬上市產品用于參考區間的數據轉移，還有助于實驗室判斷是否適用本地區。說明書中也需要提供明確的溯源信息，可以為檢測系統的可比性提供支持。

實驗室可以通過分析臨床大樣本數據庫，尋找影響特定分析物參考區間的因素，比如;通過大數據分析，促甲狀腺激素濃度可能與性別、季節、抽血時間等因素有關。實驗室也可以通過實驗室信息系統（LIS）間接建立分析物的參考區間。

總之，參考區間是體外診斷中定量產品非常重要的一個指標，合理準確的參考區間可以為臨床提供有效的信息，有利于臨床決策。目前部分上市產品參考區間建立不合理，可能有入組人群不合理，統計方法不恰當等原因，導致檢驗結果難以解釋。定量檢測試劑不僅要求檢測結果的準確，還要參考區間制定的合理，針對不同的分析物，了解其影響因素，合理分組分別研究，這樣檢驗結果才準確可靠。