臨床生物化學分析中基質效應,已日益受到重視。最早是在酶活力測定中用人工制備的參考物質時發現。在酶法分析與免疫化學分析中,普遍存在的基質效應影響了定量測定的準確性。
基質(matrix) :
尚無統一的解釋,曾稱為“一種分析物(analyte)的環境(milieu)”,即指標本中除分析物以外的一切組成。以血清膽固醇(Chol)測定而言,就是指Chol以外血清中的一切成分及其物理、化學性質。
按美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)文件的定義,“基質效應”(matrixeffect)是指:
①標本中除分析物以外的其它成分對分析物測定值的影響;
②基質對分析方法準確測定分析物的能力的干擾。廣義來說,基質效應也應包括已知的干擾物(膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸等干擾物),但目前只將基質效應限于生物材料中未知或未定性的物質或因素(如粘度、pH等)的影響。基質效應所致分析結果的偏差稱為基質偏差(matrix bias)。用作校準物質或質控物,經過處理的混合血清,由于血清機制的理化性質在處理過程中的改變,在常規測定上往往出現基質偏差。基質偏差的出現也與分析系統(包括方法、試劑及所用儀器設備)有關,所以有人將基質效應定性為方法、材料與基質的特異性反應。
按NCCLS文件的定義,指:
(1)標本中除分析物以外的其他成分對分析物測定值的影響。(2)基質對分析方法準確測定分析物的能力的干擾。廣義說來,基質效應也應包括已知的干擾物(如Chol測定中膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸等都是干擾物),但目前只將基質效應限于生物材料中未知或未定性的物質或因素(如粘度、pH等)的影響。
在基質效應的評估方法方面,通常認為測定新鮮(或冰凍)血清無基質效應,決定性方法或參考方法也無基質效應。參考訪法與常規方法測定同一批新鮮血清的結果一致,表示這項常規方法沒有方法誤差,如有差異則代表常規方法的“校準偏差”(calibration bias)。
用參考方法與常規方法測制備物(如室間質評樣品)時往往得不一致結果,這種差異稱作調查偏差(survey bias)。調查偏差與校準偏差之差即基質偏差。
基質偏差(matrix bias):
基質效應所致分析結果的偏差稱為基質偏差。用作校準物質或質控物的經過處理的混合血清,由于血清基質的理化性質在處理過程中的改變,在常規測定上往往出現基質偏差。 基質偏差的出現也與分析系統(包括方法、試劑及所用儀器設備)有關,所以有人將基質效應定性為方法、材料與基質的特異性反應。
制備物(processed material)
用于血脂常規測定的校準液(calibrator)及用于技能對比試驗(proficiency test,PT)或室間質量評價(EQA)的樣品(如質控血清)。以Chol測定為例,全酶法測Chol始于1974年,在此以前用化學反應測Chol時,除了一些已知的干擾因素外尚未提及基質效應問題。1979年才由Cooper指出Chol酶法中校準液與病人血清的反應性不同,可使Chol測定值偏低5%~7%。1994年CAP調查570實驗室時用了參考方法定值的新鮮冰凍血清為調查材料,15個同方法測定chol組中仍有11個組出現基質偏差,同時用制備物的4個組中,3個有基質偏差。有的報告指出TG、HDL-C常規方法與CDC的參考方法比較,有明顯偏差,甚至>10%。McNamura等發現血清冰凍可在免疫法(用apoAI與E抗體分離LDL)直接測定LDL-C時出現明顯基質效應,血清冰凍保存2~26周后,LDL-C測定值平均偏低10%左右。由于新鮮血清與凍干血清的apoAI測定值一致,顯示凍干對apoAI測定不產生基質效應,故apoAI參考血清以凍干形式提供。但凍干對apoB有極明顯的影響,在不同原理的免疫法中,基質偏差高達-26%~+4%,但這種變化也包括apoB分子本身的結構變化在內。所以apoB參考血清是液態冰凍保存的。
減少基質效應的主要措施包括:
1、改進室間質評樣品,使其作用更像新鮮人血清;
2、改進儀器設計及試劑組成;
3、選擇方法及方法學參數,使其適應性更強,且容易掌握,對制備物(校準物、室間質評樣品與質控物)基質的確切性質不敏感。
“基質”對測定物的影響在很多情況下是未知的。進行室間質控調查時,應該按測定的方法、使用的儀器等條件的不同,分別建立不同組別的統計學分析。
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